死体积狭义上指的是色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置（进样口）到检测位置（检测器流通池）这一段的体积（PS:除去色谱柱中填料体积），一旦色谱柱连接，这段体积（图示橙色管路）是不变的（死的）。

对于HPLC来说，该如何计算死体积呢。

死体积(dead volume,V₀)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，V_m）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有V_m参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。

死时间(dead time,t₀)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。

测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液（方法中会有规定，例如：尿嘧啶，少量NaNO₃或甲醇溶于流动相得到的溶液，也有直接用100％色谱纯甲醇进样的情形）时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间（t₀），这就是t₀的实测结果。

在我们使用或维护的过程中，如果涉及管路等配件的更换，应该选择与原规格一致的配件，以确保死体积与原来一致，避免死体积的增加而带来峰形的展宽。

接装色谱柱时，需确保管线接头匹配完好（特别注意peek管接头的使用，以及管线与色谱柱的连接处）避免形成接头空腔（如下图）。